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DNA鉴定之同步检测Amelogenin及SRY基因座鉴定性别

    检测Amelogenin基因座鉴定性别,特别是根据XY同源的Amelogenin基因第一内含子在X染色体上有6bp缺失的特征鉴定性别的方法,具有灵敏、快速、准确、对降解DNA样本有效等特点,目前广泛应用于医学、考古学、产前诊断等领域,但Santos RF等(1998)对DNA鉴定性别的方法的可靠性进行了研究后,对根据XY同源的Amelogenin基因鉴定性别的方法提出了质疑。他对350例来自世界不同地区的无关正常男性DNA样本进行了分子杂交和/PCR扩增检验。发现其中2例来自斯里兰卡的男性标本Y染色体短臂的靶序列缺乏阳性结果。通过探针杂交发现缺失包括DYS7/ADYS7/B92R7/ALLY22g/ABCF。通过交替使用多对探针及多对针对Amelogenin基因鉴定性别的引物,均仅扩增出X特异性片段。据此结果,他建议法医DNA分析及产前鉴定胎儿性别宜采用复合扩增的方法,同步检测Amelogenin基因及性别决定基因SRYsex determing gene)更稳妥。基本方法有:

    1. DNA用常规方法用有机法或Chelex 法提取。

    2. Amelogenin基因引物用Amel AAmel B,序列同前。SRY引物序列为:

    F11 5-ATA AGT ATC GAC CTC GTC GGA A-3

    R7 5-GCA CTT CGC TGC AGA GTA CCG A-3

    3. 扩增体系为:反应体积12.5ul,其中含1u金牌DNA聚合酶、引物各1umol/L,dNTP200umol/L,1.5mmol/L MgCl2,人基因组DNA 1020ng。循环程序为94 10min94 20s60 20s72 40s30个循坏后72℃保温10min.

    4. 扩增产物用T5%C3% PAG电泳,胶长20cm、电泳缓冲液1×TBE,恒电流40mA电泳2h。银染显带。正常女性仅有X特异性产物106bp,正常男性有Y特异性产物分别为112bp93bpX特异性产物106bp。而Amelogenin基因Y特异性片段缺失男性Y特异性产物仅93bpX特异性产物为106bp

 

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