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亲子鉴定报告中的Chelex 提取法

    现在法医科学界流行的另一种DNA提取法,是直接在样本中加入(例如血液、血痕或精液)螯合树脂悬浮液。1991年引入法医DNA界的Chelex®100Bio-rad Laboratories,Hercules,CA)是一种离子交换树脂,常以悬浮液的形式加入样本中(Walsh et al.,1991)。Chelex是苯乙烯和二乙烯基苯的共聚体,它包含成对的亚氨基乙酰乙酸,可螯合多价金属离子,如镁离子。就像磁铁吸附铁一样,镁离子也被吸附、连接起来。将镁离子从反应体系中去除后,降解DNA的核酸酶会失活,从而保护DNA分子。

    在多数方法中,生物样本,例如血痕,加入% Chelex悬浮液煮沸几分钟后细胞破裂释放DNA。而开始的样本清洗有利于去除污染以及亚铁血红素和其他蛋白质之类的抑制物(Willard et al.,1998)。100℃可使DNA变性,裂解细胞膜,破坏细胞膜,破坏细胞蛋白。通过快速离心使Chelex悬浮颗粒和细胞碎片沉降到离心管底部,上清液可直接进行PCR扩增反应。

    用Chelex提取的血痕或精斑DNA并不适用于RELP分型,因为Chelex在提取过程中使双链DNA变性生成单链DNA。因此,只可进行PCR分析。但是,Chelex提取法可以去除PCR反应的抑制物,单管提取DNA减少实验室污染的可能性,适用于PCR分型方法。

    在Chelex提取液中加入过多血液或者血痕也会抑制PCRAmpFlSTR®试剂盒手册推荐加入3ul全血或者近3mm×3mm的血痕。

 

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