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DNA鉴定之预防污染

PCR的敏感性需经常向实验室人员强调,以确保没有影响DNA分型结果的污染。由于该技术对低量DNA的敏感性,PCR反应的污染总是被关注。检验者如操作PCR反应不慎,可能疏忽地加入自己的DNA。同样警察或现场勘察人员如果操作不当会污染收集到的作为证据的样本。因此,每件物证的收集要用干净的镊子或勤换一次性手套。
为发现实验室污染,要保留法医DNA实验室成员的基因型分型,作为污染DNA分型的可能性记录。这是经常提到的工作人员排除数据库。实验室人员在PCR扩增之前处理样本时要穿工作服( Ruyyt et aJ.,2003)。适当的遮蔽物,如实验用衣物、手套、面罩、发网用来预防皮肤细胞或毛发脱落到扩增管中。这些细致的操作在处理微量或降解检材时尤为重要。
一些实验室避免PCR污染的技巧如下:
(1)前PCR和后PCR的样本操作过程在空间上要分开。通常使用一个独立的房间或超净工作橱进行PCR扩增反应。
(2) PCR用的移液器、试剂等物品要与实验室的其他器材分开放置,特别是与分析PCR产物的器材分开。
(3)要戴一次性手套并经常更换。
(4)如果可能,反应可在层流净化罩中完成。
(5)在处理每一新样本时要用防气溶胶的吸头并更换,防止交叉污染。
(6)试剂要小心处理防止出现DNA或核酸酶污染。
(7)当PCR扩增区不用时,用紫外线照射,使用异丙醇和(或)lOc/o漂白溶液清洁工作区和仪器。确保在DNA提取时或PCR之前破坏无关的DNA( Kwok及Higuchi,1989;Prince及Andrus,1992)。
当一个未被扩增的样本被扩增DNA污染,会导致PCR产物的继续扩增。扩增DNA比没扩增的DNA浓度要大很多,在PCR反应中会优先复制,而未扩增的DNA会被掩盖。疏忽地将很小体积的完全扩增DNA混入未扩增的DNA中,会导致扩增和检测的“污染”。因此,法医实验室对作为证据的样本要在嫌疑人样本之前进行检测,避免现场作为证据的样本被嫌疑人的扩增DNA污染。
移渡器的吸头不要重复使用。在吸头中的一小滴PCR产物含有10亿个可扩增的序列 拷贝。相比而言,1ng的人类基因组DNA仅含单拷贝DNA标记约300个。
 

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