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DNA鉴定之测序(SNP分型方法和技术的检测方法)

      在既有的各类方法中,测序( sequencing)对突变的检测相对准确,但耗时、费力,旦花费高。目前出现了一种新兴的、针对人群中大规模突变检测的测序方法——多重PCR测序法(multiplex PCR sequencing)。多重PCR测序的原理是将待测基因切割成数百个碱基大小;同时在一组反应管中进行20~40个PCR反应及脱氧测序反应;然后将含有20~40组序列的终止反应池上样到测序胶的单组泳道上;电泳分离后转到尼龙膜上,用片段专一性的寡核苷酸探针和膜杂交,读出相应的PCR片段序列。原始反应池中有多少PCR反应就杂交并洗脱多少次,以用于阅读分析有的序列。此方法的优势是从一块胶上可以取得更多的测序信息,信息量提高20~40倍,并避免了以往发现突变后再进行测序的 “两步走”过程。20重PCR同时测序的方法已很可靠、成熟并被用于常规研究中,β-肌浆球蛋白全序列测定及所含突变的鉴定是对该技术的最初检验。多重PCR测序针对众多个体的横向检测,将随着自动测序的介入,使其速度和精确度得到进一步的提高。
 

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