13683316786
客服在线时间:8:00-22:00
首页 > DNA知识 > 相关知识 >

亲子鉴定之软组织的DNA提取

人体组织是提取染色体DNA理想的材料,也是常见的物证检材。碎尸案对现场提取的尸块常需作同一认定,强奸致孕案,对引产胎儿组织作DNA分析认定亲权关系等。常用组织脏器检材依次有脑、肺、肌肉、皮肤、淋巴结等。肝脾等脏器中DNA含量较高,但肝脾中各种核酸酶很活跃,因此,DNA极易分解,往往不易得到大分子的DNA,不作为首选脏器材料。组织块送检前的保存很重要,为了减少核酸被降解,得到组织检材后应尽快冷冻保存,通常在- 200C左右即可,有条件的可在液氮中速冻,如条件不允许,可将组织放70%乙醇暂保存,注意不能用福尔马林固定保存的方法。针对不同条件、环境下的组织材料,取材方法各有不同。一般情况下,取深部肌肉,特别是筋膜包裹的肌肉效果较好。须保留足够的组织检材以备复检,一般取50~200壳为宜。脑组织DNA含量较多,新鲜脑组织是提取DNA理想材料。碎尸检材,原则上什么部位新鲜取什么组织,应剖开碎尸部分,尽量提取深部肌肉。人流的胚胎组织,须分离母体与胚胎部分,因比重不同用生理盐水浸泡,可将两者分开。绒毛组织的DNA代表胚胎组织的DNA。法医物证检验送检样品可能是新鲜组织,也可能是高度腐败的组织块,或是保存多年的甲醛固定组织,石蜡包埋组织。组织DNA的提取,原则上与血液等检材相同,分述如下:

(一)新鲜组织或冷冻组织DNA的提取方法:
方法1
(1)组织DNA的提取需先将组织用灭菌去离子水、乙醇冲洗灭菌。
(2)取10~50克组织切碎后匀浆,加TES 2~4ml、10% SDS 0.2~0.4ml、10mg/ml PK 20~40µl,55℃保温5~8h,直到完全消化。
(3)然后用酚氯仿萃取DNA,步骤同前。
注意事项:
(1)匀浆,研磨虽然能破碎大块组织,但同时也会因匀浆过程中机械剪切力使DNA受到损伤。因此应尽量温和操作,缩短匀浆时间。
(2)这种方法主要用于DNA - RFLP分析的检验技术。
方法2
(1)将组织于- 20℃以下冷冻,用手术刀片刮取l~5mg放人1.5ml离心管中。
(2)加5%Chelex - 100 200µl,10mg/ml的PK 2~3µl,于56℃保温6~8h,并不时振荡,直到组织完全消化。
(3)高速震荡5~10s,在100 ℃水浴中煮沸8min。
(4)高速震荡5~10s,15000r/min离心3min,上清液4℃保存备用或- 20℃储存。
注意事项:
Chdex - 100法提取DNA关键是尽量取检材新鲜部分,但是量不宜太多。提取过程中56℃孵化,保温时间要足够,振荡要充分。
方法3
(1)取组织0.1g剪碎放于1.5ml离心管内,加0.5ml细胞裂解液(10mmoI/L Tris-HCl pH8.0,15mmol/L NaCl,10mmol/L EDTA - Na2 pH8.0,0.40/0 SDS),10µl蛋白酶K(10mg/ml),56℃消化1h,100℃煮沸10min,漩涡震荡Imin。
(2) 5000r/min离心1min,取上清液3~5ul作PCR模板。
(二)高度腐败组织的DNA提取:
方法1
 (1)取腐败相对较轻的组织0.5g放于1.5ml离心管内,加0.4ml细胞裂解液(10mmol/LTris-HCl pH8.0,15mmol/L NaCl,10mmol/L EDTA. 2Na pH8.0,0.4% SDS)、20V1蛋白酶K ( lOmg/ml);
(2) 56℃消化2h,酚-氯仿-异戊醇(25:24:1)抽提3次,氯仿-异戊醇(24:1)抽提1次;
(3)加2倍体积乙醇和1/10体积3mol/L NaAc于- 20℃沉淀过夜,15000r/min离心15min:
(4)去上清,加5% Chelex100µl,旋涡震荡Imin,100 0C煮沸lOmin;
(5) 12000r/min离心Imin,取3~5µl上清作PCR。
方法2
(1)刮取- 20℃以下冷冻的腐败组织10~20g放于10ml离心管内,加8~10ml 0.9%的NaCl,800r/min离心3min;弃上清。
(2)加TES 4.5ml、10% SDS Iml、10mg/ml的PK100µl,56℃保温2~5h,直到完全消化。
(3)用酚氯仿萃取DNA,步骤同前。
 
声明:该文观点仅代表作者本人.
阅读 ()
  • 全国3000多家

    服务预约检测人次

  • 机构

    司法机构官方授权预约合作方

  • 预约办理

    检测快速处理

  • DNA检测预约指导

    为您推荐

  • 报告解读

    详细解读报告

Copyright 2012-2020 qinzijianding.cn 版权所有:北京科鉴基因中心(华科鉴联基因科技(北京)有限公司) 京ICP备12051704号-6

声明:本站部分信息图片来源于互联网,如果侵犯了您的权益敬请告知网站地图.sitemap

  • 在线咨询

  • 座机

  • 微信