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DNA鉴定之毛发的DNA提取方法

毛发分毛根、毛干、毛尖三部分。毛根含有染色体DNA,但自然脱落的毛发根部含染色体DNA量极少。毛干部分含有线粒体DNA,随着近年来测序技术的发展,通过毛干mtDNA测序作个体识别已经成为较常见的技术。

(一)毛根DNA提取
1.有机提取法:
(1)取带毛根的毛发1根用乙醚洗涤去油脂,乙醇清洁表面,干燥。
(2)将单个发根剪入1.5ml离心管中,加入100µl TES(100mmol/L NaCl,10mmol/L EDTA,10mmol/L Tris - HCl pH8.0)、10% SDS 10µl和10mg/ml蛋白酶K 1µl,混匀,55℃水浴2h或37℃温浴过夜。
(3)用等体积饱和酚、酚/氯仿、氯仿各抽提一次。
(4)加1/10体积3mol/L醋酸钠(pH5.2),2倍体积预冷无水乙醇,混匀,沉淀DNA。10000r/min离心10min,弃去上清。
(5)真空干燥,10µl消毒去离子水溶解DNA备用。
2.Chelex - 100提取法
将0.5cm发根剪入1.5ml离心管中,灭菌水、乙醇分别清洗两次,晾干后加入5﹪Chelex - 100 50µl~100µl,以下步骤同Chelex - 100提取血液DNA。
3.直接煮沸法
将单个毛根剪入1.5ml离心管中,灭菌水、乙醇分别清洗两次,晾干后加入50µl~100µl灭菌水,沸水煮10min,4℃备用。
(二)毛干mtDNA提取
1.取lcm长毛干,用乙醇擦拭,放人1.5ml离心管中。
2.灭菌水、无水乙醇分别浸泡两次,每次10min。
3.晾干后如入64µl TES(10mol/L Tris pH8.0,10mmol/L EDTA,100mmol/L NaCl),10﹪SDS 20µl,10mg/ml蛋白酶K8µl,1mmol/L DTT 8µl,混匀,37℃温浴消化过夜。
4.待毛干消化完全后,等体积酚氯仿抽提,收集上清备用。
 

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相关评论:

科鉴基因来自河北廊坊的客户反馈:一年的毛发未检测出,二岁多的小孩毛发样本检测出。

2015年做的个人亲子鉴定,大人采集的带毛囊的头,但是放置了有一年多,小孩的二岁多,也采集的带毛囊的头发,送到鉴定中心,说是最好提供五岁以上两根拔起的毛发,两种样本都是不符合标准要求的,样本已经送到鉴定中心,想检测看看,一周左右,实验完全,孩子的毛发样本检测到DNA数据,大人的没有检测到,可能是放置的时间太长。之后2016年好不容易补到大人的毛发样本,就很快送到鉴定中心。检测得到大人的DNA数据,与之前检测的小孩的DNA数据比对,得到结果。

科鉴基因来自河北固安的客户反馈:2根带毛囊的头发到北京做亲子鉴定。

2016年做的个人亲子鉴定,当时只采集男方的两根毛发,毛囊很明显,且能粘在纸上。到鉴定中心知道毛发要求五岁以上两根拔起最少五根带毛囊的。两根有点少,如果检测结果不够,可以补样加测或是重新检测。一周左右,得到结果。

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