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DNA鉴定之Chelex提取法提起骨、牙组织的DNA

骨骼、牙齿由于有外部硬组织的保护,因此能够抵抗外界环境的影响,DNA不易被降解,在软组织腐败或炭化的情况下,从软骨、骨骼、牙齿等硬组织中提取DNA是惟一的选择。肌体软组织高度腐败肌肉变黑,甚至液化的情况下,从软骨组织仍可能提取到DNA扩增分型的模板,所以软骨组织是理想的检材。对于骨骼、牙齿样本,宜选骨髓、牙髓,其次选择干骺端、其他骨松质丰富的部位,最后选择骨密质部分。
暴露在野外现场的骨骼、牙齿标本首先要进行清洗工作。将标本用蒸馏水冲洗干净、干燥,用灭菌细砂纸磨去骨外层部分,并在紫外灯下照射杀菌1~ 2h,以避免微生物或外源DNA的污染,再进行以下步骤。
Chelex提取法:

1.较新鲜的检材

腐败尸体、碎尸等受多种因素影响DNA降解,因此可同时取骨、牙等检材。

(1)取量1~5mg加5% Chelex - 100 200µl于56℃水浴中温浴8h;
(2)高速震荡5~10s,在100℃水浴中温浴8min;
(3)高速震荡溶液5~10s,在室温下15000r/min离心2min,上清液4℃保存备用或-20℃储存。
2.陈旧骨骼
(1)在1.5ml的离心管中加入2mg骨粉,用0.5ml灭菌去离子水清洗三次,弃去上清。
(2)在离小管中加入悬浮好的5%Chelex溶液200µl,10µg/µl蛋白酶K 4µl。高速震荡溶液5~10s。
(3)在56℃水浴中温浴8h,高速震荡溶液5~10s。
(4)在100 ℃水浴中煮沸8min,高速震荡溶液5~10s,在室温下15000r/min离心2min。
取上清液用等体积氯仿:异戊醇(24:1)提纯三次,上清液4℃保存备用或- 20℃储存。
 
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