13683316786
客服在线时间:8:00-22:00
首页 > DNA知识 > 相关知识 >

DNA鉴定-三种DNA提取方法

(一)QIAGEN法

采用QIAGEN公司的QIAamp@ DNA mini and blood mini提取试剂盒,经过蛋白酶K消化、硅膜过滤、洗涤杂质与DNA洗脱几个步骤后可以得到纯度较高的DNA。具体操作步曩蟹下瞬述:

1)在脱蜡后的待检样本中加入180µl Buffer ATL,另加20µl蛋白酶K,摇匀置56℃中孵育消化直至组织完全消化,液体呈清亮为止。
2)加200µl AL缓冲液置70℃裂解10min。
3)加200µl乙醇(96%~100%)振荡混匀。
4)在离心机上稍作离心后,将全部液体小心转移到硅膜层析柱上,以6000g (8000r/ min)离心2min,弃收集液。
5)将硅膜层析柱移至另一干净收集管上,小心加入500µl AW1缓冲液,以6000g (8000r/min)离心2min,弃收集液。
6)将硅膜层析柱移至另一干净收集管上,小心加入500µl AW2缓冲液,以6000g (8000r/min)离心2min,弃收集液。
7)再以20 000g (14 000rlmin)离心3min以使硅膜完全干透。
8)将硅膜层析柱移至一普通离心管(1. 5ml)上,加20~100µl TE缓冲液将结合在硅膜上的DNA洗脱。甲醛固定组织的洗脱液体积为200yl,2片石蜡包埋组织的洗脱液体积为100µl,H.E染色切片组织的洗脱液体积为50µl。
9)在室温(15~25℃)条件下静置约1min,以20 000g (14 000r/min)离心1min,收集DNA洗脱液。
(二)IQ法
采用Promega公司的Tissue and Hair Extraction Kit (for use with DNA IQTM)提取试剂盒,经过蛋白酶K消化、磁化树脂结合(磁化架)、洗涤纯化(lysis buffer,3次)和DNA洗脱(Elution buffer 100µl,65℃)四个步骤可完成DNA提取,操作过程如下所述。
1)在脱蜡后的待检样本中加入200µl含有蛋白酶K(1.8mg/ml)和DTT (0. Imol/L)的孵育缓冲液(IB),摇匀,置于56℃中孵育消化,直至组织完全消化,液体呈清亮为止。
2)加400µl消化缓冲液(lysis buffer)。
3)加14µl树脂(Resin),振荡混匀,置于室温5min后再振荡2s立即放置在磁化架上结合,移除多余液体。
4)再加100µl含有DTT (0.01mol/L)的消化缓冲液(lysis buffer),振荡2s立即放置在磁化架上结合进行洗涤纯化。重复3次。
5)在磁化架上将树脂(Resin)嘹干5min,加20~100ul洗脱缓冲液(EB)振荡后置65℃5min,然后振荡2s后立即放置在磁化架上,收集液体DVA。
(三)Chelex-100法
1) 56℃消化(200µl 5%Chelex,40µl 10mg/µl蛋白酶K,8µl 1mol/L DTT) 至溶液清澈。
2)剧烈震荡5 5~10s。
3)沸水煮8min。
4)剧烈振荡5~10s; 14000r/min离心5min;取上清液用于扩增反应。

更多详情:http://www.qinzijianding.cn

声明:该文观点仅代表作者本人.
阅读 ()
  • 全国3000多家

    服务预约检测人次

  • 机构

    司法机构官方授权预约合作方

  • 预约办理

    检测快速处理

  • DNA检测预约指导

    为您推荐

  • 报告解读

    详细解读报告

Copyright 2012-2020 qinzijianding.cn 版权所有:北京科鉴基因中心(华科鉴联基因科技(北京)有限公司) 京ICP备12051704号-6

声明:本站部分信息图片来源于互联网,如果侵犯了您的权益敬请告知网站地图.sitemap

  • 在线咨询

  • 座机

  • 微信