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DNA鉴定之甲醛固定和石蜡包埋组织及病理切片DNA检测的样品预处理

      用于组织包埋的固体石蜡为多种烃烷混合物,熔程为50~65℃,其化学性贯稳定,在通常条件下不与酸性(除硝酸外)和碱性溶液发生作用。迄今尚无石嫱能直接导致包埋组织DNA降解的报道。但石蜡可阻碍消化液对组织的渗透,从而抑制蛋白酶K与组织内蛋白质的接触,影响组织消化和DNA释放。在DNA提取过程中,如未能有效去除石蜡,形成的DNA-石蜡混合液将不利于PCR扩增。现阶段最为有效的脱蜡方法是用石蜡溶剂二甲苯进行脱蜡,其次还有水浴脱蜡。操作步骤分别如下所述。

      1)二甲苯脱蜡:①将石蜡包埋组织切成5~10µm厚的薄片,置于1.5ml离心管中,加Iml二甲苯颠倒振摇40min以上;②用无水乙醇离心沉淀洗涤3次;③在40℃的加热块上烘干。
      2)水浴脱蜡:①将石蜡包埋组织切成5~10µm厚的薄片,置于1.5ml离心管中,加Iml STE缓冲液(10mmol/L Tris-HCI,100mmol/L NaCl,Immol/LEDTA);②72℃水浴10min;③插入吸水滤纸条,将浮蜡及STE吸干。再加入Iml STE,反复多次,至石蜡除净,烘干。
 
 
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