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DNA鉴定之血液、精液和唾液的预试验

    犯罪现场的法庭证据形式多样。例如,在性犯罪案的现场可提取到一块床单。在法医实验室中,这条床单经过仔细的检查后选定某些区域再进一步检验。在从样本中提取DNA前,应先进行预试验’以确定在某份物证(例如一条裤子)上是否有血液、精液之类的生物体液。在一件脏内衣上检测血痕或精斑仅能试着分析。法医关注的三种基本斑迹来自血液精液和唾液。阴道分泌物、尿液和粪便鉴定对调查也很重要。    j

    血清学是一种被广泛应用的利用抗原和血清抗体反应的实验室检测方法。例如,混合抗A、抗B血清和一份待检血样,根据凝集反应进行AB0血型分型。在现代法医生物学领域,血清学仍起着重要作用,但是在一些方面则次于DNA,因为预试验并不能像DNA分型一样具备个体识别能力。

    1.血痕的检测

    血液是由血浆和红细胞( erythrocyes)、白细胞(leukocyres)、血小板(thrombocvtes)等固体成分组成。多数血液的预试验着重于检测血红蛋白分子。血红蛋白存在于红细胞中,转运氧气和二氧化碳。Abacus Diagnostics公司(West HillsCA)ABAcardHema TraceR 试剂盒可用简单的免疫层析法对人血进行识别。这项试验的检测限为0.07µgml的血红蛋白,对人类、高级灵长类动物及白鼬的血液具有特异性(Johnston et a1.,2003)

    鲁米诺( Luminol)是用于血液识别的另一种预试验,因电视系列剧《CSI:鉴证实录》  ( Crime Scene Investigation)而广为人知。o.】g3一氨基.邻苯二甲酰肼和5Og的碳酸钠混合后加入lOOml的去离子水即制成鲁米诺试剂。使用前加入0. 7g的过硼酸钠(Saferstein 2001)。向要检测的物体上喷洒鲁米诺,可快速检测大面积的血痕。喷洒过的样本必须在  黑暗的环境中才能看到清晰的荧光。鲁米诺还可定位稀释IOOO万倍的微量血(Saferstein  2001)o犯罪现场的证据检材用鲁米诺检测后,对DNA检测没有抑制作用(Gross et al. 1999)。预试验并不干扰后续DNA检测的实证,对法医实验室决定怎样处理生物证据检材非常重要( Hochmeister et a1.,1991Budowle eta1.,2000)

    2.精斑的检测

    2/3以上需进行法医DNA检测的案件涉及性犯罪证据。几毫升精液中通常含有数以千万计的精子。精斑的特异性检测有:镜下检出精子、酸性磷酸酶( AP)或前列腺特异性抗原(PSAp30)检测。一些实验室用显微镜观察精子的存在,作为性犯罪证据。然而,无精子或少精的男性在其射精时没有或仅有少数精子。另外,做过输精管结扎手术的男性不释出精子。因此,精液特异性酶试验在性犯罪案件中确认精液的存在时是很有用的。

    酸性磷酸酶是前列腺分泌到精液中的一种酶,精液中的含量通常比身体其他体液高出400(Sensabaugh ,1979Saferstein ,2001)。加几滴0【,萘酚磷酸钠和固蓝B后呈现紫色,或加人4一甲基伞基磷酸盐后在紫外灯下出现荧光,均可表示存在AP。面积较大的针织物可将衣物或床单压在同等大小的湿滤纸上转移,再用滤纸进行预试验。对大部分针织物选择性

的筛查,为后续的检验确定精斑的位置(Saferstein2001)。

    前列腺特异性抗原发现于20世纪70年代,其中包含名为p30的蛋白质(因其分子量为30 000Da),具有法庭科学价值(Sensabaugh,1978)。p30最初被认为只存在于精液,后来有报道称也少量存在于乳汁(YuDiamandis,1995)和其他体液中。PSA在精液中的浓度为3004200ng/ml(Shaler,2002)Seratec (Goettingen,Germany)Abacus诊断(West HillsCA)标记PSA/p30试剂盒(类似早孕试验试剂)可用于法医学精斑确证实验( Hochmeisteet al.,1999; Simich et al.,1999)

    3.精子的直接观察

    许多法医实验室倾向于将观察到精子作为精子的确证试验。最常用的方法是用去离子求润湿的棉签提取针织物或人类皮肤上已于的精液。将获得的细胞涂在显微镜载玻片上,加热固定。固定的细胞用一种“圣诞树”染料染色,这种染料中包括硫酸铝、核坚牢红、善味酸和靛红(Shaler,2002)o将染色后的载玻片置于显微镜下可观察到精子特异的头部囊长尾巴。圣诞树染料可将精子头部的前端染成红色或粉红色,后端染成深红色,精子的中言墨呈蓝色,尾巴被染成黄绿色( Shaler,2002)。弗吉尼亚大学的John Herr芷研究一些用荧光标记精子头部而特异性抗体标记尾部的“精子素描”方法,以便在女性上皮细胞过多情况下观察到精子细胞。

    4.唾液斑的检测

    针对淀粉酶的预试验可用于检测唾液的存在。唾液斑基本上是肉眼看不到的,非常难  观察。评估法医学样本的酶含量有两种常见方法:Phadebas试验和淀粉碘化物辐射状扩散试验( Shaler2002)。通常可在咬痕、烟蒂和水瓶上检到唾液斑(Abaz et a1.,2002Shale 2002)。目前正在研究一种利用mRNA图谱对包括唾液在内的各种体液进行检测的分子生物学方法(JuusolaBallantvne2003)。这种分子生物学试验具有极高的特异性和灵敏性,可同时检测血液、精液和唾液。

更多详情:科鉴基因

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