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北京科鉴亲子鉴定中心之精确基因型分型的重要性

    同一基因座的STR基因分型是通过比较样本与相同基因座等位基因ladder的大小而确定的,因而不同的电泳均需要有高精确度,才能保证等位基因ladder的电泳和未知样本的电泳间正确比对。检测系统的精确度通过在正常的系统操作条件下,对已知样本或等位基因ladder进行分析来确定。

    分离和检测平台的精确度必须小于+/-0.5bp,既能分辨微变异等位基因,又能分离相差一个核苷酸的完全重复等位基因。通常情况下,PCR产物的分子量越大,检测的错误率越大。因此,与小基因座如D3S1358TH01比较,如FGAD18S51等较大STR基因座的等位基因会有较大的检测变异。

    对于ABI 310用户,由于在两个等位基因ladder间的大量样本依次进样电泳,不同电泳之间的比较要求较高的精确度,以保证电泳间的比对。即使用平板电泳分析样本,因为每一板上ladder有限,比对不同泳道之间样本时也要求高精确度。这一原则同样适用于多个毛细管电泳分析系统。

    ABI 310的精确度通常小宇0.1bp。即使电泳时2℃或3℃的微小室温变化可以引起等位基因峰的漂移,与内标有轻微不同,就会导致片段长度不同。针对此问题,应增加等位基因ladder的电泳,如每10个样本作一个,而不是20个,这样分析样本时可利用与之最近的ladder

 

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