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亲子鉴定的PCR扩增与分型技术规范

1 基因座

    选用多态性基因座(如STRSNP等类型)进行PCR扩增,其中,常染色体STR基因座宜符合如下要求:(1)经过群体遗传学调查,多态性高,非父排除率在0.7以上。(2)经过500次以上减数分裂的家系调查,基因座的突变率在0.002以下。目前,建议采用商品化试剂盒进行检验,检测系统的累计非父排除率应达到99.99%以上。除常染色体基因座外,建议在需要时增加Y-STRX-STR的检验。其中,Y-STR系统可选择DYS456DYS389IDYS390DYS389IIDYS458DYS19DYS385a/bDYS393DYS391DYS439DYS635

DYS392Y GATA H4DYS437DYS438DYS448等基因座进行单倍型检验;X-STR系统可用GATA172D05HPRTBDXS6789DXS6795DXS6803DXS6809DXS7132DXS7133DXS7423DXS8377

DXS8378DXS9895DXS9898DXS10101DXS10134DXS10135DXS10074等。

2 扩增试剂

    建议选用商品化试剂盒(带荧光标记的PCR体系)。若选用其它来源的扩增体系,须经验证、认可后方可用于日常检案。每批检验均应用标准样品(已知浓度和基因型的Control DNA)和(或)以前检验过的、已知基因型的样本作为阳性对照,以不含DNA的样本作为阴性对照。

3 PCR体系与温度循环参数

    按试剂盒的操作说明书进行。

4 扩增产物的检测与结果的判读

    使用荧光分析仪,对PCR产物进行毛细管电泳分析,使用等位基因阶梯(Ladder)作为参照品来判别样本的基因型,步骤方法按照仪器操作手册。

 

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