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支原体检测

支原体检测

2021年科鉴基因平台的支原体检测法已更新为荧光PCR+毛细管电泳。替代原来的PCR法+恒温法,灵敏度更高、更精确。

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北京科鉴基因中心

北京科鉴基因中心

等级: [专业机构]

评价: 4.9分

中心公告:结果客观真实反应。可提供上门采集样本服务,接收国内外邮寄样本(仅限个人鉴定)。同时提供STR分型检测技术培训和解决方案。

温馨提示: 周六日提前一天预约,安排值班接待办理。

中心地址:北京市海淀区

办理时间:周一到周日:9:00-17:00(周六日提前一天预约)

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项目用途:  细胞培养液是否有支原体污染。

项目规格:  荧光PCR+毛细管电泳

检测周期:  5-7个工作日。

办理方式:  邮寄样本,上门取样。

样本类型:  细胞悬液、细胞保存卡、细胞悬液、细胞冻存液、DNA

样本要求:  细胞数量大于1000000个,DNA大于400ng

2021本平台的支原体检测法已更新为荧光PCR+毛细管电泳。替代原来的PCR法+恒温法,灵敏度更高、更精确。该方法可覆盖ATCC/DSMZ报道的细胞培养支原体污染中常见的10大类55个亚种的污染。

 

支原体检测
在细胞培养过程中,支原体感染的情况常有发生。当细胞(特别是传代细胞)被支原体污染后,细胞内的DNA、RNA及蛋白表达会发生改变,而细胞的生长率通常并未发生显著的影响,因此细胞被支原体污染一般难以察觉。美德华生使用支原体特异性引物扩增细胞培养样本,与含有支原体的阳性标准品和不含有支原体的阴性标准品比对,便可知道细胞样本中是否含有支原体。除此之外,还可以根据扩增产物的片段大小判断污染细胞的支原体的种类。

PCR法检测的支原体

13种支原体大约占污染细胞的支原体种类的99%左右,因此PCR能达到99%;
+恒温法则能达到99.9%。

科鉴基因可以提供PCR法+恒温法支原体检测。暂不提供培养法支原体检测。

《PCR法支原体检测试剂盒》可用于检测一切可能含支原体的样品,比如:

(1)体外细胞培养的上清;
(2)血清;
(3)各种体液,如唾液、尿液、鼻腔分泌物等;
(4)别的液体样品。本产品仅供研究使用。
产品简介
    哺乳动物细胞的培养,支原体(Mycoplasma)污染是个世界性的问题。支原体污染几乎可以改变细胞的所有参数,导致实验结果的不准确、甚至完全错误(支原体污染对细胞的详细危害,请参考本公司的网站:www.yisemed.com)。从2013年开始,《Nature》期刊已正式要求投稿的文章,如涉及细胞培养都要进行支原体检测。相信会有越来越多的高水平期刊将做出同样的支原体检测要求。
    培养法是相对可靠的支原体检测技术,但是该方法非常耗时的,需要数周,不适合作为细胞培养液中支原体污染的快速检测。此外,通过固体培养法无法检测污染细胞的一种最常见的支原体,即猪鼻支原体(M.Hyorhinis)。这是因为猪鼻支原体无法在支原体固体培养基上形成可见的菌落。而猪鼻支原体约占所有支原体污染的20-50%。
    有的实验室使用荧光染色法检测支原体,但是该方法灵敏度太低,当检测成阳性时,细胞经常已经严重污染。
    本公司已经开发出了专用于体外细胞培养的《一步法恒温支原体检测试剂盒》,与PCR法支原体检测相比,其具有许多优点:耗时短、灵敏度高、操作简单、不会被细胞代谢产物抑制、结果无需电泳肉眼可直接判断等。
    尽管如此,《一步法恒温支原体检测试剂盒》可能也有个小缺点:因为《一步法恒温支原体检测试剂盒》需要至少同时使用4条引物才能完成扩增,其引物设计相对困难。虽然经我们测试,该试剂盒至少可认识其说明书中列举的13种支原体,而这13种支原体大约占污染细胞的支原体种类的99%左右。但是,不排除《一步法恒温支原体检测试剂盒》无法识别个别在体外细胞培养中出现概率极低的支原体。为此,我们特意开发了具有广谱识别能力的《PCR法支原体检测试剂盒》。

    经测试,本公司开发的《PCR法支原体检测试剂盒》至少可以识别在体外细胞培养中曾经报道出现的20种支原体,根据文献报道,这些支原体基本上占污染细胞的支原体种类的100%。具体如下:(1)M. hyorhinis、(2)M. fermentans、(3)M. arginini、(4)M. hominis、(5)M. orale、(6)M. salivarium、(7)M.pirum、(8)Acholeplasma laidlawii、(9)M. agalactiae、(10)M. bovis、(11)  M. bovoculi、(12)Acholeplasma axanthum、(13)M. buccale、 (14) M. pneumoniae、(15)M. arthritidis、(16)M. pulmonis、(17)M. gallisepticum、(18)M. gallinarum、(19)M. canis、(20)Ureaplasma urealyticum(注:M.为Mycoplasma的缩写)。
如果客户发现除上述20种支原体外,还有其他的支原体也会污染体外培养的细胞,或者客户纯粹就是想检测其他的支原体,请告诉我们支原体的名称,我们将进行序列比对,然后告诉你本试剂是否可以识别。此外,根据支原体DNA的序列,本试剂盒可以识别100多种至今已发现的支原体,具有广谱的识别能力。
 
    此外,作为支原体检测领域的共识,单独使用任何一种支原体检测方法,都无法做到100%正确,既不会漏检(假阴性),也不会多检(假阳性)。严格的支原体检测,至少需要使用两种(最好使用三种)不同原理的支原体检测方法同时进行检测,才能使检测结果接近100%正确。
 
    如果您想得到100%正确的支原体检测结果(比如,开展细胞治疗的客户,进行干细胞培养的客户,生产血清、胰酶、培养液的客户,出售各种原代培养细胞系和肿瘤细胞系的客户等),任选本公司生产的《一步法恒温支原体检测试剂盒》、《PCR法支原体检测试剂盒》和《发光法支原体检测试剂盒》中的两种进行检测,将会得到比较满意的结果,检测的正确率应该在99.9%以上。如果同时使用这三种试剂盒进行检测,检测的正确率应该在99.99%以上。
平台信息

法医物证鉴定平台

法医物证鉴定平台是是遵照中华人民共和国司法部颁布的鉴定机构管理办法,经北京司法局核准登记的专业司法鉴定平台。

法医物证鉴定平台业务

鉴定领域:司法亲子鉴定、个人亲子鉴定、移民亲子鉴定、落户亲子鉴定、胎儿亲子鉴定、亲缘关系鉴定、DNA身份识别、线粒体DNA检测、基因身份证、DNA寻亲觅祖及种属鉴定等鉴定项目。

北京科研技术平台

北京科研技术平台是国内早期一批从事DNA检测研究的平台。其STR分型检测技术较早应用亲子鉴定和细胞鉴定,领衔建设协助国内多家DNA实验建设和人员培训,向行业输送大量的DNA检测研发工作者。同时开发了基因检测行业新的多种产品,为STR分型检测行业贡献力量。在亲子鉴定和细胞鉴定上有着延续十多年的经验,同时产前无创亲子鉴定技术,有着较高的质量控制标准。

北京科研技术平台业务

鉴定领域:个人亲子鉴定、产前无创亲子鉴定、个体识别、人源细胞STR鉴定、小鼠细胞STR鉴定、种属鉴定、猴源细胞鉴定、仓鼠细胞鉴定、大鼠细胞鉴定、HLA分型、支原体检测(荧光PCR+毛细管电泳)、核型分析(NGS技术)、精斑血斑确认。

中心点评(11)

4.8

专业水平:4.9分服务水平:4.9分位置环境:4.8分

全部(20) 交通便利(6) 服务热情(5) 法医专业(5) 解读清晰(3) 还会再来(1)

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